分光光度计是以不连续的波长对反射物体或透射物体进行采样的测量器,将成分复杂的光分解为光谱线。不同的物体有不同的分子结构,不同的波长对光的吸收能力也不同,所以每个物体都有特定的吸收光谱。
分光光度计使用产生多个波长的光源,通过系列分光装置产生特定波长的光源,透过测量的样品后,一部分光被吸收,样品的吸光值被计算,转换为样品的浓度。在实际运用过程中,有几个因素导致仪器测量精度下降,包括以下几点。
1、吸光度(透过率)精度
透射率和吸光度的误差越大,测试结果的可靠性越差,显然会影响测试数据的准确性。
2、波长精度
根据分光光度法的原理,照射到样品池的单色光必须与样品吸收光谱的任意一个吸收峰的波长相对应。由于仪器的制造和调整误差,单色光的实际波长与仪器的波长读数之间存在一定的误差。
样品中大部分的主要吸收峰有一定的宽度,波长精度要求允许宽度。但是,在吸收峰宽度小且吸收峰的两侧边缘比较陡的情况下,必须注意波长精度的影响。
3、杂散光
杂散光是由光学部件的制造误差和光学部件和机械部件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光,随着样品浓度的增加,杂散光的影响也增大,对分析结果造成一定的误差。
在紫外短波长区域,光源的强度和探测器的灵敏度明显减弱,杂散光的影响不容忽视。因此,杂散光的大小也是仪器性能的重要指标之一。
4、基线的直线度
基线直线度是整个频带内各波长的噪声表现,基线直线度直接影响紫外可见分光光度计光度精度的灵敏度和检测下限或使用范围,是紫外可见分光光度计中非常重要的技术参数之一。
用户购买和使用时,基线的平直度有这一特殊的重视程度,成为购买和使用的重要技术指标。但是相对于影响仪器检测精度的其他因素,基线的平直度是目前国内外研究者重视程度不够的技术指标。
5、频谱带宽
光谱带宽是影响紫外可见分光光度计光度精度的重要因素。如果光谱带宽不同,由于测试得到的数据不同,因此光谱带宽不同,分析误差也有很大差异。